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    嘔吐毒素免疫親和柱,操作簡便吸附力高

    產品型號:FD-C31

    更新時間:2020-04-07

    簡要描述:

    上海飛測嘔吐毒素免疫親和柱,操作簡便吸附力高,可用作糧食谷物飼料中嘔吐毒素的純化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。

      【測定原理】

      上海飛測嘔吐毒素免疫親和柱產品測定的基礎是抗原抗體反應,抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內凝膠介質上,樣品中的DON經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱,在免疫親和柱內,DON與抗體結合,洗滌液通過免疫親和柱除去未被結合的雜質。最后采用甲醇洗脫DON,然后進行相關分析。

      【所需材料】(不提供)

      (1)設備及器皿耗材:天平、粉碎機、離心機、渦旋混勻儀或搖床(轉速≥200r/min);量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器(100μL~1000μL)、快速定性濾紙、玻璃微纖維濾紙(whatman934-AH,直徑11cm,孔徑1.5μm)、20mL玻璃注射器等。

      (2)試劑:甲醇(色譜級)、聚乙二醇8000(PEG)、蒸餾水或去離子水。

      【試劑配制】

      0.1%吐溫20-PBS溶液:將0.1%吐溫20-PBS粉末(廠家提供)直接用900mL水全部溶解后,用HCl或NaOH調pH至7.4,最后用水定容至1L。

      5M NaOH溶液:稱取20g NaOH,溶于100mL水中。

      【樣品制備】

      ----準確稱取25g(精確至0.01g)粉碎的樣品,加入5g聚乙二醇8000,并與125mL水混合,搖床振蕩提取15min;

      ----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;對于pH低于6.0的玉米加工副產物及飼料等的濾液或上清液,需要用5M NaOH調pH至7.0左右,并用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

      ----準確移取2.5mL混勻濾液(相當于0.5g樣品)過親和柱。

      【親和柱凈化】

      注意:整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!

      ----3mL柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下突出部分,插回柱子上,另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷,然后再插回柱子上(柱管內偶見有小氣泡屬正常現象,不影響親和柱的使用);

      ----準確移取上述混勻濾液,注入針筒中,調節針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

      ----用20mL 水沖洗柱子(對于飼料及玉米加工副產品等顏色較深的樣液,先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水沖洗柱子,最后用10mL水沖洗柱子。),流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體;

      ----準確加入1.5mL甲醇(色譜級)洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體。收集全部洗脫液,進行相關測定。

      【檢測方法】

      IAC-HPLC法檢測

      ----過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,直接HPLC測定;或在50℃下用氮氣緩緩地吹至近干,加入流動相混勻,過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,參照GB 5009.111-2016或GB/T 30956-2014條件進行HPLC測定。

      【保質期】

      有效期為12個月。

      生產日期見包裝盒。

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