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    玉米赤霉烯酮免疫親和柱吸附力高,柱容量大

    產品型號:

    更新時間:2020-07-08

    簡要描述:

    上海飛測玉米赤霉烯酮免疫親和柱吸附力高,柱容量大,適用于糧食及糧食制品、食品、飼料等樣本中的ZEN凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。

      【產品用途】

      玉米赤霉烯酮(ZEN)免疫親和柱適合于和HPLC、LC-MS及ZEN酶免分析試劑盒結合使用,定量檢測ZEN。適用于糧食及糧食制品、食品、飼料等樣本中的ZEN凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。

    玉米赤霉烯酮免疫親和柱

      【測定原理】

      玉米赤霉烯酮免疫親和柱測定的基礎是抗原抗體反應,抗玉米赤霉烯酮(ZEN)的單克隆抗體連接在柱內凝膠介質上,樣品中的ZEN經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過ZEN免疫親和柱,在免疫親和柱內,ZEN與抗體結合,洗滌液通過免疫親和柱除去未被結合的雜質。采用甲醇洗脫ZEN,然后進行相關分析。

      【所需材料】(不提供)

      (1)設備及器皿耗材:天平、粉碎機、離心機、渦旋混勻儀或搖床(轉速≥200r/min);量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器(100μL~1000μL)、快速定性濾紙、玻璃微纖維濾紙(whatman934-AH,直徑11cm,孔徑1.5μm)、20mL玻璃注射器等。

      (2)試劑:甲醇(色譜級)、乙腈(色譜級)、lv化鈉、蒸餾水或去離子水。

      【試劑配制】

      0.1%吐溫20-PBS溶液:將0.1%吐溫20-PBS粉末(廠家提供)直接用900mL水全部溶解后,用HCl或NaOH調pH至7.4,用水定容至1L。

      5M NaOH溶液:稱取20gNaOH,溶于100mL水中。

      【樣品制備及凈化】

      (1)糧食及糧食制品

      ----準確稱取40g(精確至0.01g)粉碎的樣品,加入4glv化鈉;

      ----與100mL乙腈-水溶液(9+1,v/v)混合,搖床振蕩提取15min;

      ----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;

      ----準確移取10mL濾液或上清液,加入40mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

      ----準確移取10mL混勻濾液(相當于0.8g樣品)過親和柱。

      (2)醬油、醋、醬及醬制品

      ----準確稱取25g(精確至0.01g)樣品到100mL容量瓶中;

      ----加入純乙腈定容至100mL,搖床振蕩提取15min;

      ----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;

      ----準確移取10mL濾液或上清液,加入40mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

      ----準確移取10mL混勻濾液(相當于0.5g樣品)過親和柱。

      (3)酒類

      ----準確稱取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類使用前先置于4℃冰箱冷藏30min,過濾或超聲脫氣)或其他不含二氧化碳的酒類試樣20g(精確至0.01g)樣品于50mL容量瓶中;

      ----加入純乙腈定容至50 mL,搖床振蕩提取15min;

      ----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;

      ----準確移取10mL濾液或上清液,加入40mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

      ----準確移取10mL混勻濾液(相當于0.8g樣品)過親和柱。

    真菌毒素免疫親和柱

      (4)大豆、油菜籽及植物油

      ----準確稱取40g(精確至0.01g)樣品,加入4glv化鈉;

      ----加入100mL乙腈-水(9+1,v/v),搖床振蕩提取15min;

      ----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;

      ----準確移取10mL濾液或上清液,加入40mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

      ----準確移取10mL混合濾液(相當于0.8g樣品)過親和柱。

      (5)飼料原料及成品料等

      ----準確稱取20g(精確至0.01g)粉碎的樣品,加入4glv化鈉;

      ----加入100mL甲醇-水溶液(8+2,v/v),搖床振蕩提取15min;

      ----用快速定性濾紙過濾4000r/min,離心5min,對于pH低于6.0的玉米加工副產物及飼料等的濾液或上清液,需要用 5M NaOH調pH至7.0左右;

      ----準確移取10mL濾液或上清液,加入30mL 0.1%吐溫20-PBS稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

      ----準確移取5mL混勻濾液(相當于0.25g樣品)過親和柱。

      【親和柱凈化】

      注意:整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!

      ----3mL柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下突出部分,插回柱子上,另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷,然后再插回柱子上(柱管內偶見有小氣泡屬正常現象,不影響親和柱的使用);

      ----準確移取上述混合濾液,注入針筒中,調節針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

      ----用20mL水沖洗柱子(對于醬油、醋、油類以及飼料等顏色較深的樣液,先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水沖洗柱子,用10mL水沖洗柱子。),流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體;

      ----準確加入2.0mL甲醇(色譜級)洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體。收集全部洗脫液,進行相關測定。

    真菌毒素免疫親和柱操作流程

      【檢測方法】

      IAC-HPLC法檢測

      ----過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,直接HPLC測定;或在50℃下用氮氣緩緩地吹至近干,加入流動相混勻,過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,參照GB 5009.209-2016或GB/T 28716-2012條件進行HPLC測定。

      【注意事項】

      (1)玉米赤霉烯酮對人體有害,應戴手套操作。凡接觸到標樣的玻璃器皿都要用5%次lv酸鈉浸泡過夜。

      (2)不要使用過有效期的免疫親和柱。

      (3)免疫親和柱應在2~8℃保存。不要冷凍。

      (4)使用前,免疫親和柱需至少提前半小時回溫至室溫(25℃左右)。

      (5)HPLC測定值、試劑盒測定值接近zui高檢出值時,樣本的實際含量可能大于柱容量而造成流穿,建議減少上樣體積或者將樣品提取液用20%甲醇-水稀釋后再上樣。

      (6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據實際情況按比例調整,建議不少于10g樣。

      (7)玉米赤霉烯酮對光線敏感,因此樣品及其提取液應當低溫(2~8℃)、避光保存。

    真菌毒素免疫親和柱

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